Instituto Superior de Ciências da Saúde - Norte
   
  Engenharia Genética
  Hibridação
 

A hibridação é um processo fulcral na área da engenharia genética. A utilização de sondas permite caracterizar e identificar DNA, baseando-se nas propriedades do mesmo, destacando-se o emparelhamento de bases por pontes de hidrogénio e a desnaturação e renaturação das cadeias complementares. Estas reacções ocorrem entre ácidos nucleicos independentemente da sua natureza, sendo apenas necessário que se encontrem em cadeia simples (DNA:DNA, RNA:DNA ou RNA:RNA). A técnica de hibridação é importante para analisar genes expressos assim como genes não expressos. A visualização destes genes de interesse dá-se pelo emparelhamento das sondas que se encontram marcadas por radioactividade, por quimioluminescência ou por um anticorpo. São várias as técnicas de biotecnologia que utilizam a hibridação como princípio do método, como por exemplo o Northern – Blot, Southern – Blot e Colony – Blot.

 

Southern-blot

O Southern-blot é uma técnica desenvolvida por E. M. Southern na década de 70 que permite a detecção de fragmentos de DNA. Nesta técnica o DNA é digerido com enzimas de restrição e os fragmentos resultantes são separados por electroforese em gel de agarose. Após a desnaturação e transferência do DNA para uma membrana, híbrida-se com uma sonda apropriada e visualiza-se os resultados. O Southern-blot permite detectar RFLPs, VNTRs e modificações do DNA genómico, sendo utilizado para diagnósticos moleculares.




Northern-blot

O Northern-blot é uma técnica análoga ao Southern-blot, diferindo apenas no ácido nucleico em estudo, neste caso é o RNA. Este tipo de análise é importante para verificar a expressão de um certo gene, o tecido ou tipo celular onde ocorre e os factores que a regulam.

 

Colony-blot

Na técnica de colony-blot faz-se o rastreio de uma série de colónias transformadas com bibliotecas de cDNA ou de DNA genómico de um certo organismo. Estas colónias depois de crescerem são transferidas para uma membrana de nylon e após lise celular e fixação do DNA na membrana, esta é hibridada com uma sonda (cDNA ou DNA genómico) para o gene que se pretende estudar. Por autorradiografia visualiza-se qual a colónia que continha o DNA que hibridou com a sonda e isola-se o plasmídeo correspondente.

 
  ENGENHARIA GENÉTICA  
 
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Disciplina de Biotecnologia